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Ecole Nationale Supérieure Agronomique (ENSA) El Harrach (2009)

Induction de chevelus racinaires par Agrobacterium rhizogenes chez Datura sp. Essai d’optimisation de la production d’alcaloïdes

HARFI, Boualem

Titre : Induction de chevelus racinaires par Agrobacterium rhizogenes chez Datura sp. Essai d’optimisation de la production d’alcaloïdes

Auteur : HARFI, Boualem

Etablissement de soutenance : Ecole Nationale Supérieure Agronomique (ENSA) El Harrach

Grade : Magister en Biotechnologies végétales 2009

Résumé
Les alcaloïdes tropaniques présentent une grande valeur économique en particulier pour l’industrie pharmaceutique. La culture de chevelus racinaires obtenus par inoculation d’explant de Datura sp avec Agrobacterium rhizogenes offre des perspectives prometteuses pour leur production in-vitro. L’objectif de ce travail est d’essayer d’optimiser cette production. Sur l’ensemble des lignées racinaires obtenues, les lignées retenues sont DT10, DS18, DI3 et DF11 issues respectivement de la transformation génétique des espèces Datura tatula, D. stramonium, D. innoxia et D. ferox. La lignée la plus performante est DT10. Les résultas obtenus montrent que les milieux entiers (MS et B5) donnent les meilleures biomasses, les milieux dilués (½MS, ¾MS, ½B5, ¾B5) sont plus intéressants pour la production des alcaloïdes. Les concentrations 75 mM d’azote et 10 mM de calcium ont donné les poids secs les plus importants. L’essais de l’élicitation de la biomasse révèle que la concentration 10-8 M des acides salicylique (AS), acétylsalicylique (AAS) et jasmonique (AJ) donne les meilleurs poids secs. Quant à l’élicitation de la production de hyoscyamine, c’est la concentration 10-4 M de l’AJ et 10-6 M des AS et AAS qui donne les teneurs les plus élevées. A fin de perméabiliser les chevelus racinaires, un tensioactif (tween20) et du peroxyde d’hydrogène sont utilisés, 1% de tween20 libère dans la solution nutritive plus de 33 mg/l d’hyoscyamine. En utilisant cette dose dans un système de culture semi-continu, la teneur en hyoscyamine obtenue pour la première semaine est de 33,9 mg/l elle chute au-delà de manière significative pour la suite de la culture.

Mots clés : Datura sp ; Agrobacterium rhizogenes ; chevelu racinaire ; CPG ; alcaloïdes tropaniques ; optimisation ; élicitation ; perméabilisation

Présentation (ENSA)

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Page publiée le 28 février 2017